Etude de l'epissage alternatif du co-facteur de transcription pro-apoptotique TAF68

TAF6 est un co-facteur de transcription qui fait partie du complexe multiproteique, TFIID. TAF6 possede 4 isoformes et deux d'entre eux ont des fonctions opposees. TAF6alpha est l'isoforme anti-apoptotique et peut dimeriser avec TAF9, tandis que TAF6delta est l'isoforme pro-apoptotique et ne peut pas dimeriser avec TAF9. TAF6delta induit l'apoptose independamment de p53. Cette nouvelle voie apoptotique presente un interet certain et l'etude de la regulation de l'epissage alternatif de TAF6delta est essentielle pour comprendre le mecanisme par lequel TAF6delta induit l'apoptose. Nous avons donc developpe un minigene de TAF6 qui recapitule le patron d'epissage endogene. Nous avons mute le minigene TAF6 afin d'identifier des elements sur l'ARN controllants son epissage. Ces elements ont ete retrouves surtout au niveau de l'exon 2 et de l'intron entre l'exon 2 et l'exon 3. Trois sites activateurs d'epissage ont ete determines dans l'exon 2. De plus, nous avons demontre la presence d'une structure secondaire importante dans le choix du site 5' d'epissage. Nous avons aussi etabli que la distance de 30 nucleotides entre les deux sites 5' d'epissage avait un role a jouer dans le choix de ce site d'epissage. Un dernier site activateur a ete positionne dans l'intron. D'apres ces resultats de mutations et un criblage PCR d'ADNc de cellules transfectees par des siRNAs contre des proteines de liaison a l'ARN, nous avons identifie hnRNP K comme facteur trans potentiel regulant l'epissage de TAF6. Les facteurs trans liants les elements cis permettent de reguler en partie l'epissage alternatif d'un ARN pre-messager. Des experiences d'immunoprecipitation in vivo nous ont permis d'etablir qu'il existe une interaction entre l'ARN de TAF6 et hnRNP K. Le signal extracellulaire qui agit sur les elements cis et permet de changer l'epissage alternatif de TAF6 est encore inconnu. Nous avons tente de le determiner, mais, pour l'instant, nos hypotheses n'ont pas ete confirmees par les experiences menees. L'apoptose, si elle est deregulee, peut mener a des pathologies. L'expression de TAF6 et l'inclusion d'elements repetitifs Alus dans son ARN messager ont ete demontres comme etant augmentees dans les cellules tumorales du sein. Nous avons aussi commence l'etude de l'importance de ces elements repetitifs dans l'augmentation de l'expression de TAF6 dans les cancers. Nous avons identifie une mutation ponctuelle au niveau de la deuxieme sequence repetitive Alu qui peut etre retrouvee dans TAF6, mais nous ne connaissons pas encore sa fonction dans la surexpression de TAF6 dans les cancers du sein. Bref, ce memoire presente les differents resultats obtenus dans le cadre d'experiences dont le but etait d'identifier les elements cis, les facteurs trans, le signal declenchant l'epissage et le role des elements repetitifs Alus presents dans l'ARN de TAF6.;Mots-cles: epissage alternatif, TAF6delta, apoptose, TFIID, Alu.