Chlorophyllase biocatalysis of chlorophyll in organic solvent media

Cette recherche comprend l'etude de la bioacatalyse de la chlorophyllase partiellement purifiee a partir d'algue (Phaeodactylum tricornutum) dans differents milieux organiques incluant les solvants miscibles et non miscibles a l'eau et les systemes micellaires tertiaires. Les quantites optimales d'eau et de solvant, choisi en fonction de son degre d'hydrophobicite et incluant l'acetone, l'ethanol, le propanol, le butanol, le pentanol, l'hexanol, le toluene, le pentane, l'hexane, l'heptane et l'octane, necessaire a la catalyse de l'effet hydrolytique de la chlorophyllase, ont ete mesurees. Les valeurs d {dollar}Vsb{lcub}rm max{rcub}{dollar} obtenues mesurant l'activite hydrolytique de la chlorophyllase sont plus elevees chez les solvants miscibles a l'eau (log P {dollar}{dollar} 0.8). L'activite hydrolytique de la chlorophyllase decroit d'approximativement 12 fois lorsque le nombre de carbone pour les alcools, passent de 2 a 5. Certains resultats a partir du FTIR ("Fourier transform infrared spectroscopy") tendent a montrer que le phytol pourrait agir comme un donneur d'electron, ainsi, si un compose nucleophilique approprie est ajoute a un syteme biphasique, la solubilite de la chlorophylle dans l'hexane augmentera et l'activite hydrolytique de la chlorophyllase augmentera. En milieu biphasique (hexane/eau), l'addition de solvants polaires tels que l'acetone, l'ethanol, et le propanol augmente l'activite de la chlorophyllase et ce seulement a certaines concentrations. La mesure optimale de l'activite hydrolytique de la chlorophyllase en milieu micellaire tertiaire (tampon/hexane/surfactant) utilisant les polysorbates et les Spans ainsi que differentes chai nes hydrophobiques comme surfactant indique que les concentrations necessaires de surfactants sont dependantes a la fois de la chai ne hydrophobique et du groupement polaire. Toutefois, l'utilisation du Span 85 s'est avere plus approprie et les valeurs de {dollar}Vsb{lcub}rm max{rcub}{dollar} obtenues mesurant l'activite enzymatique de la chlorophyllase sont 288 fois plus elevees que dans un milieu hexane/eau ne contenant aucun surfactant. L'activite enzymatique de la chlorophyllase dans differents milieux organiques incluant les solvants miscibles et non miscibles a l'eau et les systemes micellaires tertiaires a ete determinee sur plusieurs sortes d'huiles de Canola comme substrat. Le systeme micellaire tertiaire contenant du Span 85 s'est avere le plus performant pour l'elimination de la chlorophylle enzymatiquement. Cependant, un accroissement de la quantite d'huile dans le milieu reactionnel montre une diminution de l'activite enzymatique de la chlorophyllase. Les resultats sur l'huile en systeme micellaire contenant du polysorbate 80 ou du Span 85 revelent un {dollar}Ksb{lcub}rm i{rcub}{dollar} de 3.73 et 4.56%, respectivement. L'addition de 10% d'huile dans le systeme micellaire contenant du polysorbate 80 ou du Span 85 decroit les valeurs de mesure de l'activite enzymatique, {dollar}Vsb{lcub}rm max{rcub}{dollar}, de 6.2 et de 9.6, respectivement.