La structure de la chromatine dans la regulation de la transcription des genes d'arn ribosomique chez Saccharomyces cerevisiae

Dans le but de mieux comprendre le role de la regulation de la structure de la chromatine sur la regulation de la transcription de classe I, nous avons etudie la distribution et le comportement de deux proteines associees a la chromatine au locus ribosomique. La premiere de ces proteines est Hmo1p, une proteine possedant une homologie de sequence avec le facteur UBF, un facteur de transcription de classe I present chez les vertebres. La seconde proteine est le variant d'histone H2A.Z, variant connu pour son implication dans la regulation de la transcription.;Nous avons ensuite analyse le comportement du variant d'histone H2A.Z par immunoprecipitation de la chromatine au niveau du locus ribosomique sur des cellules en croissance active, sur des cellules stimulees a la rapamycine et sur des cellules en phase stationnaire. Nous avons conclu que le variant d'histone est non seulement enrichi aux promoteurs du locus ribosomique, mais que cet enrichissement correle avec la forme euchromatique du locus ribosomique. Nous avons ensuite mesure, d'apres la quantite de nouveaux transcrits produits, l'effet de la deletion du gene HTZ1 sur la transcription de classe I. Cette deletion entraine une chute d'environ 30% de la transcription du gene d'ARNr 35S. Nous concluons donc que le variant d'histone H2A.Z fait plus que correler avec la forme euchromatique du locus ribosomique, mais qu'il joue effectivement un role dans la regulation de la transcription de classe I. Nous avons ensuite etudie le comportement du variant d'histone H2A.Z par immunoprecipitation de la chromatine au niveau des promoteurs de genes de classe II impliques dans la biosynthese des ribosomes. Nous avons donc etudie le comportement du variant H2A.Z aux promoteurs de trois genes de proteines ribosomiques (RPS18B, RPS21 et RPS22B) sur des cellules en croissance active, des cellules traitees a la rapamycine et des cellules en phase stationnaire. Nous avons conclu que non seulement le variant d'histone H2A.Z est enrichi aux promoteurs de genes "RP", mais que cet enrichissement correle avec une repression recente de la transcription. En dernier lieu, nous avons etudie l'importance de la machinerie transcriptionnelle de classe I sur les differences de "comportement" du variant H2A.Z au locus ribosomique et aux genes "RP" dans une souche PSW. Nous avons procede par immunoprecipitation de la chromatine associee au variant H2A.Z au niveau du locus ribosomique sur des cellules en croissance active et sur des cellules traitees a la rapamycine. Nous avons conclu que la difference de "comportement" du variant H2A.Z ne peut etre attribuee a la difference de machinerie transcriptionnelle.;Nous avons initialement etudie le comportement de Hmo1p au niveau du promoteur du gene d'ARNr 35S chez la levure par empreinte a la DNAseI et conclu qu'elle n'induit pas une circularisation de l'ADN a la maniere des nucleosomes, comme le fait UBF au promoteur du gene ribosomique des mammiferes. Nous avons egalement etudie l'affmite de Hmo1p pour la sequence primaire au locus ribosomique et conclu qu'elle ne possede pas d'affinite particuliere ni pour la sequence primaire du promoteur ni pour d'autres parties du locus ribosomique. Nous avons etudie la distribution de Hmo1p au locus ribosomique par immunoprecipitation de la chromatine sur des cellules en croissance active de meme que sur des cellules traitees a la rapamycine. Nous avons observe un enrichissement a proximite du promoteur, mais aucune difference en fonction de l'etat de croissance. Nous avons conclu que la proteine Hmo1p n'est pas impliquee dans la regulation de la transcription au niveau du promoteur d'ARNr 35S.