Le controle de l'epissage alternatif par les proteines hnRNP H et hnRNP A1

Les proteines hnRNP A1 sont impliquees dans l'epissage A1ternatif. Un mode d'action propose implique la formation d'homodimeres entre molecules hnRNP A1 causant un rearrangement dans la structure de l'ARN pre-messager. Cette modulation de l'ARN permettrait le rapprochement de sites d'epissage 5' et 3' d'exons situes de par et d'autres d'un exon alternatif. Le domaine riche en residus glycines est responsable, en grande partie, de l'interaction entre les deux proteines hnRNP A1. Comme la proteine hnRNP H contient aussi un domaine riche en residus glycines, nous avons postule que cette derniere pouvait moduler l'epissage alternatif de la meme maniere que hnRNP A1. Afin de verifier cette hypothese, nous avons utilise un ARN pre-messager constitue de deux sites d'epissage 5' (distal et proximal) en competition pour un seul site d'epissage 3'. En presence de sites de liaison pour hnRNP H, nous observons que le choix du site d'epissage 5' est deplace vers le site distal. Nous avons confirme le role des proteines hnRNP H dans la selection des sites d'epissage 5' in vitro et avons determine que le domaine riche en residus glycines (GRD) est important pour l'activite d'epissage de ce regulateur. Nous avons ensuite explore la possibilite que des combinaisons de sites de liaison pour hnRNP H et hnRNP A1 puissent activer l'utilisation du site d'epissage 5' distal. Nous avons observe que des combinaisons heterotypiques peuvent reproduire cette activite d'epissage. Finalement, nous avons utilise la technologie BRET ("bioluminescence resonance energy transfer") pour demontrer que des interactions homotypiques entre proteines hnRNP H et heterotypiques entre molecules hnRNP A1 et hnRNP H peuvent se former dans les cellules vivantes. Notre etude suggere que les proteines hnRNP H et hnRNP A1 peuvent changer la conformation de l'ARN pre-messager et affecter le choix du site d'epissage.;Mots cles: epissage alternatif, site d'epissage 5' en competition, hnRNP A1 et hnRNP H...