Modulation hormonale du sentier proteolytique de l'ubiquitine (French and English text)

Chez les patients souffrant de traumatismes localisés à un membre donné, la perte de protéines musculaires peut s'étendre à des sites éloignés de la blessure. De nombreuses hormones et cytokines sont en effet relâchées dans les minutes et les heures suivant un traumatisme. Parmi celles-ci, les deux hormones les mieux étudiées sont les glucocorticoïdes et l'insuline, les premiers exerçant une action catabolique sur le métabolisme protéique et la seconde possédant des propriétés antiprotéolytiques connues.; Au moins trois grandes voies protéolytiques sont présentes dans le muscle: lysosomes, protéases calcium-dépendantes, et la voie ATP- et ubiquitine-dépendante. Des études récentes suggèrent que le sentier de l'ubiquitine pourrait être particulièrement actif dans divers états cataboliques. Des travaux effectués par notre équipe et par d'autres groupes ont montré une activation parallèle de la protéolyse myofibrillaire et du sentier de l'ubiquitine en réponse à une brûlure. De plus, lors de ces mêmes travaux, il s'est avéré que les niveaux de cortisol sérique et urinaire étaient les seuls bons prédicteurs de la perte de muscle chez les patients brûlés. Nous avons donc entrepris d'évaluer le rôle potentiel des glucocorticoïdes dans la modulation de la protéolyse myofibrillaire ubiquitine-dépendante, ce qui fait l'objet de cette thèse.; Dans un premier temps nous avons démontré que l'administration de doses élevées de glucocorticoïdes à des rats adultes entraînait une activation parallèle du sentier de l'ubiquitine, ce tant au niveau protéique qu'au niveau des ARNm de diverses composantes du système, et de la protéolyse myofibrillaire, telle qu'évaluée par l'excrétion urinaire de 3-MH chez ces animaux. En l'absence de bloqueurs in vivo du sentier de l'ubiquitine il n'était pas possible de démontrer un lien de causalité entre les deux phénomènes. Nous nous sommes alors tourné vers un modèle de cellules musculaires, les myoblastes L6 de rat qui peuvent être induits à se différencier en myotubes. Nous avons démontré, à l'aide d'inhibiteurs spécifiques des divers sentiers protéolytiques, que la dégradation de l'actine musculaire induite par le glucocorticoïde synthétique dexaméthasone dans les myotubes L6 est modulée par la voie de l'ubiquitine Possédant à ce point un système cellulaire reproduisant les effets des glucocorticoïdes observés dans le muscle de rat, nous y avons alors étudié la modulation hormonale de l'expression de l'ubiquitine. Nous avons mis en évidence, en transfectant dans les cellules L6 une construction d'ADN contenant une partie de promoteur d'un gène d'ubiquitine humain dirigeant l'expression de l'enzyme luciférase, que les glucocorticoïdes induisaient une activation transcriptionnelle de ce gène d'ubiquitine qui pouvait être antagonisée par l'addition d'insuline au milieu de culture.; Ces travaux fournissent donc une base moléculaire à l'action catabolique des glucocorticoïdes sur les protéines myofibrillaires. De plus l'observation d'une modulation transcriptionnelle du gêne d'ubiquitine, couplée à l'accumulation coordonnée de diverses composantes de ce sentier protéolytique que nous avons rapportée, suggère qu'un programme transcriptionnel commun...