TC-NER dans le gene de l'ARN ribosomal 35S chez Saccharomyces cerevisiae

Divers agents environnementaux peuvent causer des dommages a l'ADN qui, si non repares, peuvent mener a des mutations et eventuellement le cancer. Des mecanismes de reparation sont donc necessaires afin de maintenir l'integrite du genome. Un de ces mecanismes est la reparation par excision de nucleotides (NER) qui va reparer des dommages qui causent une distorsion dans l'helice d'ADN comme ceux formes par les rayons UV. La NER se divise en deux sous-voies : la reparation global du genome (GGNER), responsable de reparer l'ADN transcriptionnelement inactif ainsi que le brin non-transcrit de genes actifs, et la reparation couplee a la transcription(TC-NER), responsable de reparer le brin transcrit de genes actifs. La TC-NER ne differe de la GG-NER que par la methode de reconnaissance du dommage et va reparer les dommages plus rapidement que la GG-NER. Chez Saccharomyces cerevisiae , les genes de l'ARN ribosomal peuvent exister en 2 etats distinct dans la cellule, soit actifs et transcrits par l'ARN polymerase I ou soit inactifs et recouverts de nucleosomes. Des etudes ont demontre que suite a une irradiation aux UV, il y avait fermeture des genes ribosomaux actifs et reouverture au fur et a mesure que les dommages sont repares. De plus, il a ete demontre, qu'apres irradiation, il y' avait une presence plus importante d'ARN polymerase I au debut du gene qu'a la fin. Ces evidences suggerent que la TC-NER va reparer les dommages au debut du gene et que son influence va diminuer au fur et a mesure qu'on avance dans le gene.;Ainsi, les travaux presentes dans ce memoire vise a evaluer l'impact de la TC-NER sur la cinetique de reparation de l'ADN ribosomal. A cet effet, une serie d'extension d'amorces ont ete effectuees dans differentes regions du gene de l'ARN ribosmal 35S. Ces analyses ont montre que la reparation des dommages UV au debut du gene est mediee par la TCNER alors que plus loin dans le gene, la reparation est mediee en plus grande partie par la GG-NER. De plus, l'analyse de la reparation dans la region terminatrice de la transcription a montre que la TC-NER s'arrete au site principal de terminaison Ti dans une souche WT. Alors que dans une souche ayant un defaut dans le terminaison de la transcription, rpa12A, la TC-NER arrete au site terminaison secondaire T2. Dans une autre souche deficiente dans la terminaison, nsilA, le TC-NER n'est pas detectable apres le site Ti, mais une reparation plus rapide est observee apres le site T2.;Mots cles : UV, TC-NER, ADN ribosomal, terminaison de la transcription.